DOTAP的應用與安全性

能夠包載DNA、RNA等核酸類(lèi)物質(zhì)的DOTAP大家了解嗎？為何DOTAP會(huì )在包裹核酸尤其是制備轉染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應用呢？DOTAP的安全性究竟如何呢？

提起DOTAP，大家更多想到的是包載DNA、RNA等核酸類(lèi)物質(zhì)，而不是像普通脂質(zhì)體那樣包載化療藥等化合物。那么為何DOTAP會(huì )在包裹核酸尤其是制備轉染試劑領(lǐng)域得到如此廣的應用呢？

| 中文名稱(chēng)：DOTAP

| 商品名：DOTAP

| 貨號：002002

| 化學(xué)名稱(chēng)：（2,3-二油?；?丙基）-三甲基銨-氯鹽；(2,3-二油?；?丙基)-三甲基氯化銨

| 分子式：C42H80NO4Cl    

| CAS號：132172-61-3

| 級別：藥用試劑級別

| 用途：陽(yáng)離子脂質(zhì)體

| 結構式：          

| 性狀：白色固體

| 純度：99%

| 分子量：698.56

| 熔點(diǎn)：35~38℃

| 保存條件：-20±5℃，遮光密閉

| 注意事項：避免與強酸、強堿、強氧化性物質(zhì)接觸

首先我們先了解下轉染。轉染是真核細胞主動(dòng)或者被動(dòng)導入外源核酸片段而獲得新的表型的過(guò)程，所以轉染試劑的作用就是將DNA等運輸至細胞內。陽(yáng)離子脂質(zhì)體因自身攜帶正電荷，可與核酸結構中帶負電的磷酸基團產(chǎn)生靜電作用相結合，從而將DNA穩定、高效的包裹。同時(shí)，陽(yáng)離子脂質(zhì)體也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過(guò)膜融合或細胞內吞作用將DNA遞送入細胞內發(fā)揮作用?；谕瑯拥脑?，很多研究也利用陽(yáng)離子脂質(zhì)體包裹小核酸類(lèi)藥物，如反義寡核苷酸、干擾RNA等。因陽(yáng)離子脂質(zhì)體本身也有細胞毒性，會(huì )對實(shí)驗數據造成干擾，因此在chu方設計時(shí)應注意DOTAP的用量，配合包封率以及zeta電位等指標甚至動(dòng)物實(shí)驗進(jìn)行優(yōu)化。

陽(yáng)離子脂質(zhì)體的分類(lèi)及應用優(yōu)勢

根據包載的API不同，可將陽(yáng)離子脂質(zhì)體分為兩大類(lèi)，一類(lèi)是包載以mRNA、siRNA為代biao的核酸類(lèi)藥物的脂質(zhì)體，是基因zhi療中研究zui多、應用zui廣的一種非病毒載體；另一類(lèi)是包載如紫杉醇、喜樹(shù)堿等小分子抗ai藥的脂質(zhì)體制劑，具有腫liu新生血管靶向性，對ai癥也有雙重機制作用下的好療效。

陽(yáng)離子脂質(zhì)體作為非病毒載體有著(zhù)以下這些優(yōu)勢：

保護zhi療基因在體內循環(huán)中不被降解。通過(guò)對脂質(zhì)體的表面基團進(jìn)行特殊修飾后的陽(yáng)離子脂質(zhì)體能很好地包封片段，促進(jìn)復合物與細胞膜的融合，增加DNA的攝取和表達；

高xiao穿過(guò)細胞膜和核膜，轉染細胞，使其表達/沉默基因；

如果適應癥為ai癥，則能夠選擇性的吸附于帶負電荷的新生腫liu血管內皮細胞上，抗ai效果更好。

陽(yáng)離子脂質(zhì)DOTAP的應用

前面也說(shuō)了，DOTAP是兩親分子，主要由三部分組成：極性頭部(親水基團)、連接鍵、疏水尾部。通過(guò)靜電作用與帶有負電荷的DNA分子相結合的是DOTAP的極性頭部，通常由叔胺或季銨鹽構成，后來(lái)又研究出咪唑頭部、氨基酸頭部等。其極性頭部對核酸分子的包載效率以及細胞毒性均有重要的影響。chu方中DOTAP用量越大載藥量越大，但zeta電位過(guò)高細胞毒性也越大，制劑安全性受影響，兩者需平衡。學(xué)術(shù)部的同事曾做過(guò)小鼠實(shí)驗研究即毒性：當zeta電位高于+50mV時(shí)即有可能出現注射立即死亡現象。對于包載化療藥物而言，載藥并不依賴(lài)DOTAP，chu方中可添加其它中性磷脂如DSPC、DPPC等，使用劑量方面受限較小。

早先DOTAP應用于商業(yè)化產(chǎn)品是轉染試劑。DOTAP的極性頭部通過(guò)靜電作用與帶有負電荷的DNA分子穩定結合，兩者混合后可自發(fā)形成穩定的復合物。這種轉染方法非常溫和，可避免脂質(zhì)轉染或者其它方式轉染帶來(lái)的細胞毒性作用，并且轉染效率高于其它的脂質(zhì)試劑。

目前DOTAP較為成功的應用案例有紫杉醇陽(yáng)離子脂質(zhì)體EndoTAG-1以及喜樹(shù)堿藥物的陽(yáng)離子脂質(zhì)體EndoTAG-2，其作為優(yōu)xiu的轉染試劑應用也很廣。RNA類(lèi)藥物的效果與選用的陽(yáng)離子脂質(zhì)材料密切相關(guān)，實(shí)驗中遇到問(wèn)題的時(shí)候不妨多試幾種陽(yáng)離子脂質(zhì)材料。